今すぐ始めるゲノム編集

実験医学別冊　Experimental Medicine

論文だけではわからないゲノム編集成功の秘訣Q&A TALEN、CRISPR/Cas9の極意				◆　出版社　◆　羊土社〒101-0052 東京都千代田区神田小川町2-5-1 TEL 03-5282-1211 FAX 03-5282-1212 URL https://www.yodosha.co.jp/

山本　卓／編

巻頭ガイド

ゲノム編集実験の流れ
【佐久間哲史，山本　卓】

第I部　ゲノム編集ツールに関するQ&A

第1章　TALENに関するQ&A
【佐久間哲史】

Q1　TALENの設計法・作製法について教えてください．
Q2　TALENの標的配列とスペーサー配列の長さの最適な範囲を教えてください．
Q3　TALENの標的配列にミスマッチがあった場合の切断効率について教えてください．
Q4　TALENのオフターゲット変異の調べ方について教えてください．
Q5　TALENをウイルスベクターで導入することはできますか？
Q6　TALENを大腸菌組換えタンパク質として精製することはできますか？

第2章　CRISPR/Cas9に関するQ&A
【佐久間哲史】

Q7　CRISPR/Cas9の設計法・作製法について教えてください．
Q8　標的としたい領域にPAM配列の5′-NGG-3′がみつからない場合にはどうすればよいですか？
Q9　sgRNAの標的配列の長さは20bpでなければいけないのですか？
Q10　sgRNAの標的配列にミスマッチがあった場合の切断効率について教えてください．
Q11　CRISPR/Cas9のオフターゲット変異の調べ方について教えてください．
Q12　CRISPR/Cas9の特異性を上げる方法があれば教えてください．
Q13　Cas9ニッカーゼを用いた相同組換えは可能ですか？
Q14　Cas9タンパク質が市販されていますが，それぞれで特徴がありますか？また使用例があれば教えてください．
Q15　化学合成したsgRNAを使用することはできますか？
Q16　sgRNAをU6プロモーター以外で発現させたいと思っています．組織特異的プロモーターや誘導型プロモーターは使えますか？
Q17　CRISPR/Cas9をウイルスベクターで導入することはできますか？
Q18　sgRNAライブラリーを用いたノックアウトスクリーニングについて教えてください．

第3章　TALEN，CRISPR/Cas9に共通のQ&A
【佐久間哲史】

Q19　多くのベクターがあり，どれを使えばよいかわかりません．お勧めのベクターがあれば教えてください．
Q20　短い配列のノックインを行いたいと考えています．ssODNの設計の仕方について教えてください．
Q21　レポーター遺伝子をノックインしたいと考えています．ターゲティングベクターの設計の仕方について教えてください．
Q22　複数の遺伝子を同時に破壊したいと考えています．どのような戦略が有効でしょうか？
Q23　染色体欠失を誘導したいと考えています．どのくらいの長さまで欠失させられるでしょうか？
Q24　転座を誘導したいと考えていますが，可能でしょうか？

第II部　細胞種・生物種ごとのQ&A

第1章　哺乳類培養細胞でのゲノム編集
【落合　博】

Q25　哺乳類培養細胞では，どのようなゲノム編集が可能ですか？
Q26　哺乳類培養細胞でゲノム編集を行う際の注意事項について教えてください．
Q27　哺乳類培養細胞でゲノム編集を行う場合，どのベクターを用いればよいですか？
Q28　哺乳類培養細胞でゲノム編集を行う場合，どのような導入方法が適切ですか？
Q29　哺乳類培養細胞でゲノム編集を行う場合に必要となる材料や施設について教えてください．
Q30　哺乳類培養細胞での変異体のスクリーニング方法について教えてください．
Q31　倍数性の高い細胞やプライマリー細胞でゲノム編集は可能でしょうか？

第2章　ヒト人工多能性幹細胞（iPS細胞）でのゲノム編集
【李　紅梅，堀田秋津】

Q32　ヒトiPS細胞でゲノム編集を行う際の注意事項を教えてください．
Q33　ヒトiPS細胞でゲノム編集を行う際，どの発現ベクターを使用すべきでしょうか？
Q34　ヒトiPS細胞への遺伝子導入方法は何が適していますか？
Q35　ヒトiPS細胞のサブクローニングの方法を教えてください．

第3章　マウスでのゲノム編集
【藤原祥高，伊川正人】

Q36　マウスでは，どのようなゲノム編集が可能ですか？
Q37　マウスでゲノム編集を行う場合，どのベクターを用いればよいですか？
Q38　マウスでゲノム編集を行う場合に必要となる材料や設備について教えてください．
Q39　マウスでゲノム編集を行う場合，どのような導入方法が適切ですか？
Q40　マウスでの変異体のスクリーニング方法について教えてください．
Q41　コンディショナルノックアウトマウスの作製は可能でしょうか？
Q42　マウスでゲノム編集を行う際のその他の注意事項について教えてください．

第4章　ラットでのゲノム編集
【真下知士】

Q43　ラットでは，どのようなゲノム編集が可能ですか？
Q44　ラットでゲノム編集を行う場合，どのようなベクターを用いればよいですか？
Q45　ラットでゲノム編集を行う場合，必要となる材料や設備について教えてください．
Q46　ラットでゲノム編集を行う場合，どのような導入方法が適切ですか？
Q47　ラットでの変異体のスクリーニング方法について教えてください．
Q48　ラットでゲノム編集を行う際の，その他の注意事項について教えてください．

第5章　両生類でのゲノム編集
【鈴木賢一】

Q49　両生類では，どのようなゲノム編集が可能ですか？
Q50　両生類でゲノム編集を行う場合，どのベクターを用いればよいですか？
Q51　両生類でゲノム編集を行う場合に必要となる，材料や設備について教えてください．
Q52　両生類でゲノム編集を行う場合，どのような導入方法が適切ですか？
Q53　両生類での変異体スクリーニング方法について教えてください．
Q54　両生類でゲノム編集を行う際のその他の注意事項について教えてください．

第6章　小型魚類でのゲノム編集
【川原敦雄，木下政人】

Q55　小型魚類では，どのようなゲノム編集が可能ですか？
Q56　小型魚類におけるゲノム編集の手順を教えてください．
Q57　小型魚類での変異体のスクリーニング方法について教えてください．
Q58　小型魚類でゲノム編集を行う際の注意事項を教えてください．
Q59　小型魚類では，効率のよいノックイン法はありますか？
Q60　小型魚類の分野で開発された最新のゲノム編集技術を教えてください．

第7章　海産無脊椎動物ホヤでのゲノム編集
【笹倉靖徳】

Q61　ホヤでは，どのようなゲノム編集が可能ですか？
Q62　ホヤでゲノム編集を行う場合，どのようなベクターを用いればよいですか？
Q63　ホヤでゲノム編集を行う場合，必要となる材料や設備について教えてください．
Q64　ホヤでゲノム編集を行う場合，どのような導入方法が適切ですか？
Q65　本章で紹介されたベクターはカタユウレイボヤ以外の海産動物にも利用できますか？

第8章　ショウジョウバエでのゲノム編集
【林　茂生】

Q66　ショウジョウバエでのゲノム編集による遺伝子機能解析の概要を教えてください．
Q67　ショウジョウバエではどのようなゲノム編集が可能ですか？
Q68　ショウジョウバエでゲノム編集を行う場合，どのような準備をすればよいですか？
Q69　ショウジョウバエでの変異体のスクリーニング方法について教えてください．
Q70　ショウジョウバエでのゲノム編集についてその他の注意事項を教えてください．

第9章　カイコでのゲノム編集
【大門高明】

Q71　カイコでは，どのようなゲノム編集が可能ですか？
Q72　カイコでゲノム編集を行う場合，どのベクターを用いればよいですか？
Q73　カイコでゲノム編集を行う場合に必要となる材料や設備について教えてください．
Q74　カイコでゲノム編集を行う場合，どのような導入方法が適切ですか？
Q75　カイコでの変異体のスクリーニング方法について教えてください．
Q76　カイコでゲノム編集を行う際のその他の注意事項について教えてください．

第10章　線虫でのゲノム編集
【杉　拓磨】

Q77　線虫では，どのようなゲノム編集が可能ですか？
Q78　線虫でゲノム編集を行う場合，どのベクターを用いればよいですか？変異体のスクリーニング法についても教えてください．
Q79　線虫でゲノム編集を行う場合，どのような導入方法が適切ですか？必要な設備と手順についても教えてください．
Q80　線虫でゲノム編集を行う際のその他の注意事項について教えてください.

第11章　植物でのゲノム編集
【安本周平，關　光，刑部祐里子，刑部敬史，村中俊哉】

Q81　植物では，どのようなゲノム編集が可能ですか？
Q82　植物でゲノム編集を行う場合，どのベクターを用いればよいですか？
Q83　植物でゲノム編集を行う場合に必要となる材料や設備について教えてください．
Q84　植物でゲノム編集を行う場合，どのような導入方法が適切ですか？
Q85　植物での変異体のスクリーニング方法について教えてください．
Q86　非モデル植物でゲノム編集を行う際のその他の注意事項について教えてください．

第12章　その他の生物でのゲノム編集
【山本　卓】

Q87　報告のない生物・細胞種でゲノム編集を行う際に何に気をつけたらよいですか？

第III部　その他のQ&A

第1章　応用技術について
【佐久間哲史】

Q88　ゲノム編集ツールを転写調節に応用できるようですが，どのようなことが可能ですか？
Q89　ゲノム編集ツールをエピゲノム改変に応用できるようですが，どのようなことが可能ですか？
Q90　ゲノム編集ツールをクロマチン免疫沈降（ChIP）に応用できるようですが，どのようなことが可能ですか？
Q91　ゲノム編集ツールを染色体可視化に応用できるようですが，どのようなことが可能ですか？

第2章　情報収集について
【佐久間哲史】

Q92　ゲノム編集に関する最新情報を入手できるウェブサイトを教えてください．
Q93　ゲノム編集に関するトラブルシューティングを相談できる窓口はありますか？

第3章　ゲノム編集生物の取り扱いについて
【田中伸和，山本　卓】

Q94　ゲノム編集で作製した生物は，遺伝子組換え生物に該当するのでしょうか？