バイオウェブ - 超実践バイオ実験イラストレイテッド

細胞工学別冊

超実践バイオ実験イラストレイテッド				◆　出版社　◆　株式会社Gakken

■　第1章　実験ノートの作り方

1　必須な項目

2　書いておくと良い項目

■　第2章　実験の基本と試薬の調製

1　実験室での注意事項

1-1　ラボベンチ
1-2　ラボコート
1-3　ラボグローブ

2　実験器具の取り扱いと注意

2-1　メスシリンダー
2-2　パスツールピペット，駒込ピペット
2-3　メスピペット
2-4　マイクロピペッター
2-5　マイクロピペッターのキャリブレーションと練習
2-6　マイクロチューブ
2-7　電子天秤
2-8　遠心機
2-9　オートクレーブ
2-10　乾熱滅菌
2-11　pHメーター
2-12　pH試験紙
2-13　分光光度計

＜コラム＞OD（optical density）とA（absorbance）

3　試薬の調製

3-1　単位のいろいろ
3-2　希釈計算の仕方
3-3　実験用の水
3-4　滅菌法

■　第3章　分子生物学実験の基本操作

1　酵素の取り扱い方

2　制限酵素によるDNAの切断

3　フェノール抽出

4　アルコール沈澱

4-1　アルコール沈澱に用いられる塩
4-2　エタノール沈澱（エタ沈）
4-3　イソプロピルアルコール沈澱（イソプロ沈）
4-4　PEG沈澱

5　DNAのアガロースゲル電気泳動

5-1　アガロースゲルの作製と電気泳動
5-2　ゲルからのDNA抽出

＜コラム＞DNAの電気泳動の実際

■　第4章　大腸菌の取り扱い

1　大腸菌を扱う際に必要な無菌操作

2　無菌操作の注意事項

2-1　実験器具，実験試薬の滅菌
2-2　実験器具，実験試薬の滅菌状態の維持
2-3　実験操作中における浮遊塵，落下塵の混入の防止
2-4　実験操作中における未滅菌の物への接触の防止

3　シングルコロニーのピックアップから液体培養へ

4　液体培養からプレート線画培養（ストリーキング）へ

5　液体培養からフローズンストックの作製

6　フローズンストックからの培養

■　第5章　ゲノムDNAの調製

■　第6章　PCRの基本

1　一般的なPCR法

1-1　PCR用試薬
1-2　サーマルサイクラー（PCRマシーン）

2　プライマー設計

2-1　一般的なプライマー
2-2　ネステッド・プライマー
2-3　ディジェネレート・プライマー

3　ライブラリーからの遺伝子末端の増幅

4　PCR産物の精製

■　第7章　ベクターとのライゲーション

1　ベクターの調製

1-1　1箇所で切断したベクターの調製
1-2　2箇所で切断したベクターの調製

2　ライゲーション反応の種類とインサートDNA末端の加工

2-1　制限断片のクローニング（標準的なライゲーション）
2-2　プライマー中に制限酵素サイトを入れたPCR産物のクローニング
2-3　pol I 型酵素によるPCR産物のクローニング（TAクローニング）
2-4　α型酵素によるPCR産物のクローニング（TArget クローニング）
2-5　平滑末端を作ってクローニングする場合

■　第8章　形質転換からコロニーPCRまで

1　コンピテントセルの準備

1-1　市販のコンピテントセル
1-2　簡単なコンピテントセルの作製法

2　コンピテントセルの形質転換

2-1　大腸菌へのDNAの導入
2-2　寒天培地への植え継ぎ
2-3　コロニーの確認

3　インサートチェックのためのコロニーPCRとマスタープレート

3-1　PCR反応マスターミックスの作製と分注
3-2　コロニーピッキングとマスタープレートの作製
3-3　PCR
3-4　アガロース電気泳動とゲル染色
3-5　マスタープレートとの照合

＜コラム＞ブルーホワイトセレクション

■　第9章　プラスミドプレップ

1　キットを使わないミニプレップ（アルカリ法）

1-1　プラスミドの調製
1-2　プラスミドの精製

2　キットを使ったミニプレップ

3　ミディプレップやマキシプレップなど

＜コラム＞エンドトキシン

■　第10章　プラスミドDNAのシークエンシング

1　シークエンス反応

2　反応産物の精製

3　PRISM310の運転

4　終了したら

＜コラム＞長いDNAはどうやって読む？

■　第11章　RNAの抽出

1　通常の細胞や動物組織からのRNA抽出

2　繊維質の組織からのRNA抽出

3　poly(A)RNAの精製

■　第12章　cDNAの合成と定性的RT-PCR

1　cDNAの合成（逆転写）

2　一般的なRT-PCR

2-1　preparativeなRT-PCR
2-2　analyticalなRT-PCR
2-3　多数の微量サンプルからのRT-PCR

3　5'RACEと3'RACE

＜コラム＞RT-PCRのコントロール

■　付録　試薬の組成・調製法とマスターシート

1　いろいろな試薬の組成とその調製法

1-1　一般的な試薬
1-2　大腸菌用培地の培養試薬

2　マスターシート

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